全血总RNA抽提试剂盒
产品分类: RNA及MicroRNA提取
主要产品有:本试剂盒采用独特的配方和添加剂,能高效的分离血液中的RNA,另外本试剂还可以有效地抑制各种外源性和内源性的RNA酶,同时结合特制的纯化柱,能最大限度的保持RNA的完整性、高得率以及纯度,可用于RT-PCR、Real Time PCR、 芯片分析、Norther Blot等下游实验,并能保留小RNA,为需要进行小RNA研究,如MicroRNA的用户提供了强有力的工具。
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产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品价格 |
LN-0117A | 50次 | 500.00元 | |
LN-0117B | 100次 | 900.00元 |
【产品简介】
本试剂盒采用独特的配方和添加剂,能高效的分离血液中的RNA,另外本试剂还可以有效地抑制各种外源性和内源性的RNA酶,同时结合特制的纯化柱,能最大限度的保持RNA的完整性、高得率以及纯度,可用于RT-PCR、Real Time PCR、 芯片分析、Norther Blot等下游实验,并能保留小RNA,为需要进行小RNA研究,如MicroRNA的用户提供了强有力的工具。
【试剂盒组成】
试剂盒组成 | LN-0117A (50次) | LN-0117B (100次) |
红细胞裂解液 | 60ml | 120ml |
裂解液LB | 60ml | 120ml |
漂洗液WB | 24ml | 48ml |
洗脱液EB | 2×2ml | 2×2ml |
离心纯化柱 | 50个 | 100个 |
说明书 | 1份 | 1份 |
注意: 1. 本试剂盒最多处理2ml健康人类全血(健康人的全血中白细胞含量约为4000-7000个白细胞/ul血液,本试剂盒最多处理白细胞数约为107)
2. 本试剂盒只适用于新鲜全血,不适用于冻存处理的血液。
3. 使用前请在按照标签提示,向漂洗液WB加入适量无水乙醇.
【试剂运输及储存条件】
试剂运输可在2-8℃环境下进行。储存时,裂解液LZ须置4℃保存,其余组分可保存在室温。本试剂盒有效期为12个月,请在有效期内使用。
【操作步骤】
1. 在血液样品中加入3倍体积红细胞裂解液 (例如,300μl血液加入900μl红细胞裂解液),颠倒混匀,室温放置5分钟,期间再颠倒混匀几次,10000g离心1分钟(若是离心机最高转速不允许,可以2500g离心5分钟),吸去上清,留下白细胞沉淀进行后续操作。如果发现红细胞裂解不完全,可以重复上述步骤1次。通常极微量的红细胞不会影响后续的 一些检测。
2. 洗涤1-2次:加入适量PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液,重悬沉淀,400-500g离心2-3分钟,弃 上清。可再重复1次,共洗涤1-2次。洗涤液的用量通常应至少为细胞沉淀体积的5倍。4℃离心效果更佳。
3. 将1ml裂解液LB的加入到白细胞沉淀的离心管中用移液器吹打数次混匀。将裂解物转移至无RNA酶的1.5ml离心管中,充分振荡30s,之后操作见第4步。
注意:如果不是正常人类全血,需要根据血液中的白细胞数量确定裂解液LB使用的量,以保证白细胞被完全裂解。
4. 把裂解物于室温静置5min后,加入0.2ml三氯甲烷,小心盖上管盖,剧烈摇动15s。
5. 将离心管再次置于室温2-3min,然后4℃,12,000 x g离心15min。
注意:离心会使溶液分为三相,含有RNA的水相上清液,包含蛋白和DNA的中层以及包含DNA的下层有机相。在 4℃离心对于溶液的分层是非常关键的。
6. 将上清水相转移至另一新的无RNA酶离心管中,并加入1.5倍体积的100%乙醇,漩涡振荡混匀5s。
7. 立即吸取700μl样品以及有可能形成的沉淀,加入带有2ml收集管的离心纯化柱,轻盖盖子,室温静置2min。10,000 x g,室温离心15s,弃尽废液。
8. 将剩余的样品转移至离心柱,重复第7步。
9. 往离心柱中加入700μl漂洗液WB,轻盖盖子,10,000 x g,室温离心15s,弃尽废液。
注意:第一次使用前请确认是否已经按照标签提示往WB中加入适量无水乙醇。
10. 往离心柱中加入500μl漂洗液WB,轻盖盖子,10,000 x g,室温离心15s,弃尽废液。
11. 重复第10步,往离心柱中加入500μl漂洗液WB,轻盖盖子,10,000 x g,室温离心15s,弃尽废液。洗涤后10,000 x g离心空柱2min干燥硅胶膜。
注意:完全去除洗液对最后溶解是非常重要的,洗液的残留会影响最终的洗脱。
12. 将离心柱转移至一新的无RNA酶的1.5ml离心管中,往硅胶膜中央滴加洗脱液EB,轻盖管盖,室温静置5min,10,000 x g 离心1min洗脱RNA。
注意:洗脱体积不宜小于30μl,否则会影响洗脱效果。
13. 把洗脱液滴加回硅胶膜重复第7步洗脱。
14. 如需后续操作,请始终将溶解的RNA至于冰上,保存请置于-80℃。