植物组织线粒体DNA快速提取试剂盒(离心柱)
产品分类: 基因组DNA抽提
主要产品有:线粒体是存在于绝大多数真核细胞内的一种基本的重要的细胞器。它是细胞进行氧化磷酸化的场所。线粒体基因组不仅是研究DNA结构与复制转录的良好模型,也是研究真核细胞核酸与蛋白质合成非常合适的模型系统。本试剂盒提供了一套方便的工具从各种细胞和组织中提取MT DNA,产量高,纯度好,不污染基因组DNA。纯化的MTDNA可用于多种研究,比如酶处理分析、Southern blotting、克隆、PCR分析以及扩增等。
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植物组织线粒体DNA快速提取试剂盒(离心柱)
产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品价格 |
LG-0112A | 植物组织线粒体DNA快速提取试剂盒(离心柱) | 50次 | 750.00元 |
LG-0112B | 100次 | 1350.00元 |
【产品简介】
线粒体是存在于绝大多数真核细胞内的一种基本的重要的细胞器。它是细胞进行氧化磷酸化的场所。线粒体基因组不仅是研究DNA结构与复制转录的良好模型,也是研究真核细胞核酸与蛋白质合成非常合适的模型系统。本试剂盒提供了一套方便的工具从各种细胞和组织中提取MT DNA,产量高,纯度好,不污染基因组DNA。纯化的MTDNA可用于多种研究,比如酶处理分析、Southern blotting、克隆、PCR分析以及扩增等。
【试剂盒组成】
试剂盒组成 | LG-0108A(50次) | LG-0108B(100)次 |
裂解液PLB | 36ml | 72ml |
RNase A(10mg/ml) | 500μl | 1ml |
溶液MTA | 12ml | 24ml |
溶液MTB | 24ml | 48ml |
溶液MTC | 18ml | 36ml |
漂洗液WB | 12ml | 24ml |
洗脱液EB | 2×2ml | 4×2ml |
离心纯化柱 | 50 | 100 |
说明书 | 1份 | 1份 |
【试剂运输及储存条件】
试剂运输可在室温环境下进行。储存时,溶液MTA加入RNase A后须置4℃保存,溶液MTC可置4℃保存,其余组分可保存在室温。
【自备实验器材】
试剂类:异丙醇、无核酸酶水。
耗材类:经无核酸酶水处理并高压灭菌(121℃,30分钟)的2ml和1.5ml离心管及10μl、200μl、1000μl吸嘴、一次性手套、口罩。
设备类:电动匀浆机、各种规格的移液器、低温和常温台式离心机、震荡仪、研钵,手术刀,金属镊,水浴锅,冰盒。
【操作步骤】
1. 取适量植物组织(50-100mg)用电子天平称量,放入液氮中研磨至粉末状。然后立即将该组织转移至加有600μl裂解液PLB的无核酸酶的离心管中,如仍有块状物质,用电动匀浆机在冰浴中匀浆组织约15s直到看不见明显的组织块。
注意: 取植物新鲜组织50-100 mg或干重组织20 mg,对于较难处理标本可以现在PLB中加入1-4%巯基乙醇。
2. 用移液器吸打混匀,65℃水浴30min,每隔10 min上下轻轻颠倒混匀。
3. 将上清液于4℃,14000xg低温离心30min。
4. 弃上清,得到线粒体沉淀。往沉淀中加入150μl预冷的溶液MTA,用移液器吹散混匀沉淀。
注意:请确认是否已经往溶液MTA中加入RNase A。
5. 将裂解物于37℃温水浴 1hr 以彻底除去RNA。
6. 往裂解物中加入300μl溶液MTB,轻柔颠倒离心管10次混匀,至于冰浴变性7min。
7. 加入225μl溶液MTC,轻柔颠倒离心管10次混匀,至于冰浴复性30min。
8. 4℃,12000xg低温离心6min。
9. 小心吸取上清至一新的离心管,加入0.6倍体积的异丙醇,用移液器吸打混匀。
10. 立即吸取700μl样品以及有可能形成的沉淀,加入带有2ml收集管的离心纯化柱。轻盖盖子,11,000 x g,室温离心15s,弃尽废液。
11. 将剩余的样品转移至离心柱,重复第10步。
12. 往离心柱中加入500μl漂洗液WB,轻盖盖子,11,000 x g,室温离心15s,弃尽废液。
注意:第一次使用前请确认是否已经往WB 中加入适量无水乙醇。
13. 重复第12步,用500μl 漂洗液WB再次洗涤离心柱,最后一次洗涤后,11,000 x g离心空柱1min干燥硅胶膜。
注意:完全去除洗液对最后溶解是非常重要的,洗液的残留会影响最终的洗脱。
14. 将离心柱转移至一新的无RNA酶的1.5ml离心管中,往硅胶膜中央滴加60μl无核酸酶水,轻盖管盖,室温静置1min,11,000 x g 离心1min洗脱RNA。
注意:洗脱体积不宜小于50μl,否则会影响洗脱效果。
15. 把洗脱液滴加回硅胶膜重复第14步洗脱。
16. 如需后续操作,请始终将溶解的DNA至于冰上,保存请置于-80℃。
注意:为增加DNA的得率,洗脱液体积不应少于50μl,体积过小会影响回收效率,洗脱液的pH值也对洗脱效率有很大影响,若用ddH2O洗脱液应保证pH 7.0-8.5范围内,pH低于7.0会影响洗脱效率;DNA需置于-20℃保存,以防止DNA降解。
【注意事项】
1. 操作时请使用一次性手套和口罩。
2. 第一次使用前请确认是否已经往漂洗液WB中加入适量乙醇。
3. 为增加洗脱效果,可将洗脱液EB于65℃水浴加热后使用。
【有效期】
本试剂盒有效期为12个月,请在有效期内使用。
注:本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品等用途。