λ噬菌体基因组DNA快速提取试剂盒

Quick λ Bacteriophage Genomic DNA Extraction Kit

λ噬菌体基因组DNA快速提取试剂盒

 【产品简介】

   本试剂盒的抽提试剂采用独特的配方和添加剂，能高效的裂解宿主细胞和噬菌体，分离纯化出高纯度的噬菌体基因组DNA，还可以有效地抑制各种外源性和内源性的核酸酶，同时结合特制的纯化柱，能最大限度的保持核酸的完整性、高得率以及纯度。

 【试剂盒组成】

【试剂运输及储存条件】

试剂运输可在常温环境下进行。储存时，DNase I和RNase A在-20℃保存，其余试剂于室温保存。

【操作步骤】

1.       将0.5%氯仿处理后的10ml λ噬菌体感染的液体培养物，4℃,8000×g离心10分钟除去细胞碎片和残渣。

注意：本试剂盒只适用于10ml及更小体积的培养物。离心转速不宜过高否则噬菌体可能一起沉淀。

2.       取上清至另一干净的离心管中，加入2μl DNase I和2μl RNase A，用移液器充分吸打混匀，37℃温浴30min。

注意：噬菌体培养上清可能因生长和裂解情况不同，残留的RNA和DNA的量可能不等，可根据实际情况调整消化的时间，以免引入宿主菌核酸污染或者降低噬菌体DNA得率。

3.  往裂解物中加入5ml（1/2培养物体积）沉淀液PBB，轻柔充分混匀后，冰浴1hr。

4.       4℃,10,000×g离心10min，弃尽上清，室温干燥1min。

5.       往噬菌体沉淀中加入500μl裂解液PLB，轻柔吹打重悬噬菌体，68℃温浴15min。

6.       往裂解物中加入500μl吸附液PAB，轻柔吹打混匀。

7.       加入0.5ml三氯甲烷，小心盖上管盖，剧烈摇动15s。

注意：请不要漩涡震荡。

8.       将离心管再次置于室温1min，4℃，12,000xg 离心15min。

9.       将上清水相转移至另一新的无核酸酶离心管中，并加入0.6倍体积的异丙醇，用移液器轻柔吹打混匀。

10.   立即吸取500μl样品以及有可能形成的沉淀，加入带有2ml收集管的离心纯化柱。轻盖盖子，11,000xg，室温离心1min，收集流穿液在另一新的1.5ml离心管中。

11.   将剩余的样品转移至离心柱，重复第10步。

12. 往离心柱中加入700μl漂洗液WB1，轻盖盖子，室温静置1min，11,000xg，室温离心15s，弃尽废液。

注意：第一次使用前请确认是否已经按照标签提示往漂洗液WB1中加入适量无水乙醇。

13. 往离心柱中加入500μl漂洗液WB2，轻盖盖子，11,000xg , 室温离心15s，弃尽废液。

注意：第一次使用前请确认是否已经按照标签提示往漂洗液WB2中加入适量l无水乙醇。

14. 重复步骤13一次。

15. 11,000xg离心空柱2min干燥硅胶膜。

16.   将离心柱转移至新的无核酸酶的1.5ml离心管中，往硅胶膜中央滴加70μl洗脱液EB，轻盖管盖，室温静置2-3min，11,000xg离心1min洗脱基因组DNA。

17.   把洗脱液滴加回硅胶膜重复第16步洗脱。

18.   如需后续操作，请始终将溶解的DNA至于冰上，保存请置于-80℃。

【DNA定量】

实例：用常规比色皿测量RNA浓度。

DNA样品总体积：50μl

稀释因子，1:100（10μl DNA样品+990μl无核酸酶高压灭菌水）

A260读值：0.20（在1ml比色皿中测量）

因此，DNA样品浓度= 50×A260×稀释因子=50×0.20×100=1000μg/ml

DNA样品的得率=1000×0.05=50μg

实例：用超微量比色皿测量DNA浓度。

DNA样品总体积：50μl

稀释因子，1:100（1 μl DNA样品+99 μl无核酸酶高压灭菌水）

A260读值：0.20（在超微比色皿中测量）

因此，DNA样品浓度= 50×A260×稀释因子=50×0.20×100=1000μg/ml

DNA样品的得率=1000×0.05=50μg

【注意事项】

1. 操作时请使用一次性手套和口罩。

2. 第一次使用前请确认是否已经往漂洗液WB1和WB2中加入适量乙醇。

3. 吸附液AB和裂解液PLB在低温时可能产生沉淀，请加热充分溶解后使用。

【有效期】

本试剂盒有效期为12个月，请在有效期内使用。

注：本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品等用途。