植物基因组快速提取试剂盒(离心柱)

Plant Genomic DNA Extraction Kit（Spin Colunm）

植物基因组快速提取试剂盒(离心柱)

【产品简介】

      本试剂盒的抽提试剂采用独特的配方和添加剂，能高效的裂解植物组织，分离出高纯度的基因组DNA，还可以有效地抑制各种外源性和内源性的核酸酶，同时结合特制的纯化柱，能最大限度的保持核酸的完整性、高得率以及纯度。

 【试剂盒组成】

注意：使用前请在按照标签提示漂洗液WB1、WB2中加入适量无水乙醇。如不立即使用，RNase置于4℃保存。

【操作步骤】

1.       取适量植物组织（50-100mg）用电子天平称量，放入液氮中研磨至粉末状。然后立即将该组织转移至加有65℃预热600μl裂解液PLB的无核酸酶的离心管中，如仍有块状物质，用电动匀浆机在冰浴中匀浆组织约15s直到看不见明显的组织块。65℃水浴30min，每隔10 min上下轻轻颠倒混匀。

  注意1：对于含有纤维及多糖成分比较多的组织，先在裂解液体PLB中加入终浓度为0.1%的β-巯基乙醇；

2：植物新嫩芽叶片建议取材50mg, 对于含水份较高果实类新鲜组织100 mg。 植物的种类多样，具体取材还需要根据样本实际情况合理选择材料用量。

2.       往裂解物中加入10μl RNase A，用移液器吸打混匀，37℃放置10 min。

3.       冷却至室温后，加入500μl三氯甲烷，充分混匀离心管直至混匀，切勿漩涡震荡。10,000 rpm离心5min。

4.       小心吸取上清至另一干净的无核酸酶的离心管中，加入0.6倍上清体积的预冷异丙醇，轻柔颠倒数次直至彻底混匀。

5.       吸取700μl裂解物以及有可能形成的沉淀至纯化柱，室温11,000rpm离心15s。

6.       弃尽流穿液，重复步骤6，直至将剩余样品全部通过纯化柱。

7.       往纯化柱内加入500μl漂洗液WB1，室温11,000rpm离心15s，弃尽流穿液。

注意：第一次使用前，按照标签提示加入适量无水乙醇。

8.       往纯化柱内加入500μl漂洗液WB2，重复步骤8。

注意：第一次使用前，按照标签提示加入适量无水乙醇。

9.       室温11,000rpm离心空柱1min干燥硅胶模。

10.   往膜中央滴加50μl 65℃预热的洗脱液EB，室温放置5min，室温11,000rpm离心1min，收集DNA。

11.   重复步骤11。

 注意：为增加基因组DNA的得率，洗脱液体积不应少于50μl，体积过小会影响回收效率，洗脱液的pH值也对洗脱效率有很大影响，若用ddH₂O洗脱液应保证pH 7.0-8.5范围内，pH低于7.0会影响洗脱效率；DNA需置于-20℃保存，以防止DNA降解。

【DNA定量】

实例：用常规比色皿测量RNA浓度。

DNA样品总体积：50μl

稀释因子，1:100（10μl DNA样品+990μl无核酸酶高压灭菌水）

A260读值：0.20（在1ml比色皿中测量）

因此，DNA样品浓度= 50×A260×稀释因子=50×0.20×100=1000μg/ml

DNA样品的得率=1000×0.05=50μg

实例：用超微量比色皿测量DNA浓度。

DNA样品总体积：50μl

稀释因子，1:100（1 μl DNA样品+99 μl无核酸酶高压灭菌水）

A260读值：0.20（在超微比色皿中测量）

因此，DNA样品浓度= 50×A260×稀释因子=50×0.20×100=1000μg/ml

DNA样品的得率=1000×0.05=50μg

【注意事项】

1. 操作时请使用一次性手套和口罩。

2. 第一次使用前请确认是否已经往漂洗液WB中加入适量乙醇。

3. 为增加裂解效果，可在裂解液PLB中加入终浓度为0.1%的巯基乙醇，但加入巯基乙醇后，会降低裂解液PLB的稳定性，推荐现用现加。

【保存条件及有效期】

本试剂盒置于室温（15-25℃）可保存12个月；更长时间的保存可置于2-8℃。在2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，应在使用前置于37℃下溶解沉淀。加入β-巯基乙醇的裂解液PLB 2-8℃可保存一个月，其余组分可保存在室温。

注：本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品等用途。