普通琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒

普通琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒

【产品简介】

   本试剂盒采用独特的离心吸附柱纯化酶切、PCR等反应溶液中的DNA片段，同时除去蛋白质、其它有机化合物及无机盐离子等杂质。从TBE 或TAE 电泳缓冲液配置的琼脂糖凝胶中提取高质量DNA的简单、快速、有效的技术，适合从浓度≤3％，高、低熔点琼脂糖凝胶中，回收长度为60bp~20kb的DNA 片段，小于100bp DNA 片断回收率为20~50%，0.1~10kb DNA片断回收率最大为99%,大于10kb DNA 片断回收率为30~70%。使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、文库筛选、连接和转化等实验。

【试剂盒组成】

【试剂运输及储存条件】

试剂运输可在常温下进行。储存时可存于室温（15-25℃），所有试剂适当保存，可以稳定保存12个月。

【操作步骤】

1. 将含有目的DNA片段的琼脂糖凝胶切下，并放入2.0ml 离心管中。

2. 按1:3 的比例（凝胶质量毫克数：溶胶液体积微升数）加入溶胶液PB。（每次加入的结合液最大体积不宜超过1.2ml）。例如：100mg凝胶应加入300μl溶胶液PB。

3. 于恒温水浴或金属浴中55-65℃孵育（7-10分钟）,每隔2-3分钟需将管内混悬液混匀一次，直到凝胶融化。

4. 将混合液全部转移到离心纯化柱，于10,000rpm离心1分钟，并弃去收集管内液体。如混合液体积大于 750μl可先转移750μl，其余的液体待离心弃液后，再转移。

5. 向离心纯化柱内加500μl漂洗液WB，于10,000rpm 离心1分钟，并弃去收集管内液体

注：请在第一次使用前按照标签说明在漂洗液WB中加入适量无水乙醇。

6. 重复步骤5一次。

7. 将离心纯化柱放回收集管中，10,000rpm离心1分钟，尽量除去漂洗液。将离心纯化柱置于室温放置数分钟，彻底地晾干，以防止残留的漂洗液影响下一步的实验。

8. 将离心纯化柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜中间位置悬空滴加50μl洗脱液EB，室温放置2分钟。10,000rpm离心1分钟收集DNA 溶液。注：为了提高DNA的回收量，可将离心得到的溶液重新加回离心纯化柱中，重复步骤8。

【DNA浓度及纯度检测】

回收得到的DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。DNA 应在OD260处有显著吸收峰，OD260值为1相当于大约50 μg/ml 双链DNA、40 μg/ml 单链DNA。OD260/OD280 比值应为1.7~1.9，注意：如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。

【注意事项】

1.收到本试剂盒后，请立即检查试剂瓶的包装与密封是否完好。若有破损请在收货后24小时内与本公司联系。

2.请在第一次使用前按照标签说明在漂洗液WB中加入适量无水乙醇。

3.DNA也可以用缓冲液(10 mM Tris-Cl, pH8.0) 洗脱。为了提高DNA的回收量，可将离心得到的溶液重新加回纯化柱中，重复步骤8。洗脱液的体积不应少于30μl，体积过少会影响回收的效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)，pH值低于7.0会降低洗脱效率。

4.DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。

【有效期】

本试剂盒有效期为12个月，请在有效期内使用。

注：本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品等用途。