TMB显色液(组化或膜HRP显色用)

TMB显色液(组化或膜HRP显色用)

【产品简介】

TMB显色液(组化或膜HRP显色用)(TMB Horseradish Peroxidase Color Development Solution for Immunohistochemistry or Blotting)是一种采用了最新单一溶液TMB显色技术，通过辣根过氧化物酶(HRP)催化TMB显色，用于免疫组化、原位杂交或膜显色等的显色液。本显色液也可以用于原位检测细胞或组织内源性的过氧化物酶。通常的TMB显色试剂由多个组份组成，必须在使用前进行配制，并且容易产生沉淀，使用相对不太方便，并且也容易导致结果不太稳定。本TMB显色液采用了最新的TMB显色技术，把所有的相关试剂全部配制在一个溶液中，仅由单一溶液组成，简化了操作步骤，并且使检测结果更加稳定可靠。TMB，即3, 3′,5 ,5′-Tetramethylbenzidine，是辣根过氧化物酶的常用底物。在辣根过氧化物酶或其他适当过氧化物酶的催化下，TMB会产生可溶性蓝色产物。蓝色产物通常可以在370nm或620-650nm测定吸光度。本试剂盒主要适用于免疫组化或原位杂交时HRP的显色检测，以及Western、Southern、Northern等HRP的膜显色检测。 用于免疫组化检测时，如果每个样品的显色液用量为0.1ml，则可以检测1000个样品；对于膜的显色检测，如果每次使用2.5ml显色液，则可以检测40次。

【试剂盒组成】

【运输及储存条件】

4℃避光保存，一年有效。

【注意事项】

1.         TMB对人体有刺激性，请注意适当防护。

2.         如果发现TMB辣根过氧化物酶显色液出现混浊或颜色变成蓝色，应该停止使用。

3.         为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【使用说明】

1.       对于免疫组化检测：

a. 参考免疫组化的实验步骤，在与辣根过氧化物酶标记的抗体孵育后，用适当洗涤液洗涤3-5次，每次3-5分钟。

b. 洗涤完毕后，去除洗涤液，滴加约100微升TMB显色液。

c. 室温避光孵育3-30分钟或更长时间(可在湿盒中显色过夜)，直至显色至预期深浅。

d. 去除染色液，加入去离子水或重蒸水孵育10分钟以终止反应。

e. 拍照记录或适当封片后拍照记录。如果有必要，可以使用中性红染色液进行复染后再进行拍照记录或适当封

片后拍照记录。

2.       对于膜的HRP显色检测：

a. 参考相应的实验步骤，在与辣根过氧化物酶标记的抗体孵育后，用适当洗涤液洗涤3-5次，每次5分钟左右。

b. 洗涤完毕后，去除洗涤液，

c. 滴加约适量TMB显色液充分覆盖膜。

d. 室温避光孵育3-30分钟或更长时间(可长达数小时)，直至显色至预期深浅。

e. 直接拍照记录。

【常见问题】

1.       背景显色太深。

a. 如果背景显色太深，一方面需考虑使用适当的封闭液进行封闭，例如选购适当的封闭液或使用和一抗相同来源的血

清(10%)进行封闭。另一方面，请选购经过适当吸附的二抗，以减小二抗的非特异性吸附。

b. 可以考虑缩短显色时间，或降低二抗浓度。另外，选择适当强度的洗涤液，或延长洗涤时间也会有所帮助。

2.       没有显色或显色太弱。

a. 适当提高一抗或二抗的浓度。检测二抗效果，滴一滴稀释二抗在离心管内，检测二抗是否可以被正常显色。

b. 可以考虑使用更加灵敏的放大检测体系，例如使用生物素检测体系。

c. 可以适当延长显色时间。

d. 如果上述改进不能获得预期效果，对于免疫组化或Western，可以考虑更换效果更好的一抗；对于Southern、Northern

或原位杂交，则可以考虑更换探针。

注：本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品等用途。