考马斯亮蓝染色液(常规法)

考马斯亮蓝染色试剂盒(常规法)

【产品简介】

考马斯亮蓝快速染色液(Commassie Blue Fast Staining Solution)是以考马斯亮蓝R250为染料，可用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白电泳胶的快速、高灵敏染色，或Western转膜后PAGE胶上残余蛋白的检测。本考马斯亮蓝快速染色液是一种无毒，无刺激性气味的高度环保型染色液。普通的常规方法需使用剧毒的甲醇及强刺激性的乙酸，本公司生产的考马斯亮蓝快速染色液则采取全新配方，实现了无毒和无刺激性气味。本考马斯亮蓝快速染色液只需一小时或更短时间就可以检测到低达100ng的蛋白电泳条带，而常规方法需3小时以上。无需对蛋白和凝胶进行固定，可以不进行脱色，操作更加简单。本染色液和质谱分析兼容，即经过本染色液染色的蛋白条带或蛋白点可以用于后续的质谱分析。

【试剂盒组成】

【运输及储存条件】

 常温条件下运输，4℃保存，至少一年有效。

【注意事项】

1.         本染色液呈酸性，有轻微腐蚀性，使用时请作必要防护。

2.         如果使用微波炉加热，请特别注意避免沸腾。以免因暴沸而导致凝胶碎裂。

3.         为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【使用说明】

1. 常规染色脱色方法：
  1. 电泳结束后，取凝胶放入适量考马斯亮蓝染色液中，确保染色液可以充分覆盖凝胶。
  2. 置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动，室温染色1小时或更长时间。
      注：具体的染色时间取决于凝胶的厚度和染色时的温度。凝胶较厚，温度较低，则染色时间宜适 当延长。凝胶较薄，温度较高，则染色时间可以适当缩短。通常染色至凝胶的颜色和染色液的颜色非常接近，在染色液中几乎看不清凝胶时，可以认为已染色充分。染色2-4个小时或更长时间不 会对最终的染色效果产生负面影响。
 3. 倒出染色液。染色液可以回收重复使用至少2-3次。
 4. 加入适量考马斯亮蓝染色脱色液，确保脱色液可以充分覆盖凝胶。
 5. 置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动，室温脱色4-24小时。期间更换脱色液2-4次，直至蓝色背景 基本上全部被脱去，并且蛋白条带染色效果达到预期。通常蛋白条带在脱色1-2小时后即可出现。
      注：脱色期间可以在脱色液中加入一片吸水纸，可以使部分染料吸附在吸水纸上，加快脱色。脱 色时间过长也会导致蛋白条带的颜色变浅。
 6. 完成脱色后，可以把凝胶保存在水中，用于后续的拍照等。保存在水中的凝胶会发生溶涨。如需 避免溶涨，可以把胶保存在含20%甘油的水中。长期保存可以制备干胶。
2. 快速染色脱色方法：
   1. 电泳结束后，取胶放入适量考马斯亮蓝染色液中，微波炉加热至接近沸腾或刚刚沸腾，立即停止加热。通常对于胶浓度大于10%的胶比较坚韧，在发生煮沸时不易破损；对于胶浓度小于10%的胶，宜尽 量避免煮沸，以免出现胶碎裂的情况。
   2. 随后在染色液温度较高的情况下，在室温摇床上摇动5-10分钟。
   3. 倒出染色液。染色液可以回收重复使用至少2-3次。
   4 加入适量考马斯亮蓝染色脱色液，确保染色液可以充分覆盖凝胶。
   5. 微波炉加热至接近沸腾或刚刚沸腾，立即停止加热。
   6. 随后在脱色液温度较高的情况下，在摇床上摇动5-10分钟。此时通常可以观察到比较清楚的蛋白
      条带。
   7. 更换新鲜的脱色液，重复步骤e和步骤f，直至蓝色背景基本上全部被脱去，蛋白条带染色效果达
      到预期。
   8. 完成脱色后，可以把凝胶保存在水中，用于后续的拍照等。保存在水中的凝胶会发生溶涨。如需
      避免溶涨，可以把胶保存在含20%甘油的水中。长期保存可以制备干胶。

【常见问题】

1.       无染色条带：可能上样量太少，建议电泳时加适当量的BSA等作为阳性对照。

2.       背景太高：可能杂质没有除尽，建议延长最初的蒸馏水洗涤时间或增加洗涤次数。也可以在完成染色后，把凝胶放置在蒸馏水中在室温或4℃进行洗涤。在4℃蒸馏水中浸泡过夜，通常可以取得较好的脱色效果。

3.       染色条带的灵敏度不够理想：可以使用考马斯亮蓝快速染色液进行重复染色，重复染色可以改善染色效果。在加热情况下染色可以显著提高检测灵敏度，另外染色后在室温或4℃用蒸馏水进行脱色也可以显著改善染色的灵敏度。

注：本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品等用途。