NP-40裂解液

NP-40裂解液

【产品简介】

诺伦生产的NP-40裂解液(NP-40 Lysis Buffer)是一种比较温和的细胞组织裂解液。NP-40裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP和co-IP等。NP-40裂解液的主要成分为50mM Tris(pH7.4)，150mM NaCl，1% NP-40以及sodium pyrophosphate，β-glycerophosphate，sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白降解。用NP-40裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用诺伦生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

【试剂盒组成】

【运输及储存条件】

  试剂运输可在4-8℃环境下进行。-20℃保存，一年有效。

【注意事项】

1.         为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。

2.         裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

3.         为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【使用说明】

对于培养细胞样品：

1.       融解NP-40裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。

2.   对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。

 对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞管，然后再裂解。

3.         充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

4.         裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入150微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200微升或250微升。

对于组织样品：

1.       把组织剪切成细小的碎片。

2.       融解NP-40裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。

3.       按照每20毫克组织加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)

4.       用匀浆器匀浆，直至充分裂解。

5.       充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

6.       如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈震荡使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

附：诺伦生产的各种裂解液主要特点、差异和选择

首先请参考下表，了解各种裂解液的主要特点和差异。

注：本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品等用途。