U6 Endogenous Control Kit (Probe，Two Step PCR)

                                                    U6 Endogenous Control Kit (Probe，Two Step PCR)

【产品简介】

本制品是采用Taqman探针法，两步法检测U6 snRNA，应用于对样品中的miRNA进行相对定量分析。U6 snRNA，也称为U6核内小RNA，它参与真核生物细胞核中RNA的加工，参与信使RNA前体(pre-mRNA)的剪接，使后者成为成熟mRNA。U6 snRNA管家基因定量检测试剂盒的设计包括两个反应阶段，逆转录反应以及荧光定量PCR反应，其结果可用于校正不同的样品间，某一特异的miRNA相对于U6的表达比率。

注意：ABI Prism7500，ABI Prism7500 Fast, MJ Research Chromo4，Corbett Rotor Gene 3000机型，添加5xROX Reference Dye 0.4µl/反应。

ABI Prism7000/7300/7700/7900 , Eppendorf , ABI Step One, ABI Step One Plus机型，添加50xROX Reference Dye 0.4µl/反应。

【试剂盒组成】

A.     反转录反应试剂:

B. PCR反应试剂:

【操作步骤】

1.       完全融化模板，将特异性引物、RT Master Mix、RT Enzyme Mix等试剂融化后，离心后置于冰上。

2.       若需要做梯度标准曲线，请用Standard Dilution对cDNA进行梯度稀释 (注意：梯度实验的操作容易造成PCR反应的污染，如果需要进行相关实验，操作应在超净台中单独进行)。

3.       PCR试剂准备：在冰浴条件下按下表配制反应液（举例）

反转录反应:

循环参数设定：（请参照各类仪器的操作软件进行设置）

将逆转录的cDNA取出2μl作为模板进行PCR反应

PCR反应：

注意：ABI Prism7500，ABI Prism7500 Fast,MJ Research Chromo4，Corbett Rotor Gene 3000机型，需要添加5xROX Reference Dye  0.4μl/反应。

ABI Prism7000/7300/7700/7900 , Eppendorf , ABI Step One, ABI Step One Plus机型，需要添加50XROX Reference Dye  0.4μl/反应。

PCR反应循环参数设定：（请参照各类仪器的操作软件进行设置）

【试剂运输及储存条件】

试剂盒运输可在2-8℃环境下进行。（含有ROX内参染料），储存时，须置-20℃避光保存。

【有效期】

本试剂盒有效期为12个月，请在有效期内使用。

注：本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品等用途。