One Step qRT-PCR Kit(SYBR Green)
产品分类： 定量PCR相关制品
主要产品有：本制品是适用于染料法进行RNA定量实验的专用试剂,Real-Time PCR方法以其卓越的快速性及定量性被广泛应用于科研领域，使用本制品可以准确简便地进行RNA的定量或定性分析。本试剂盒采用高效的反应体系，利用一步法使RT和PCR在同一反应体系中进行，反应过程中不需要添加试剂，无需打开管盖，避免了污染，同时提高了检测的灵敏度，可检测低至0.01pg的总RNA。本试剂盒可直接的用于对RNA模板的绝对定量的分析实验。
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产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品价格 |
LK-0111A | One Step qRT-PCR Kit(SYBR Green) | 50次 | 800.00元 |
LK-0111B | 100次 | 1440.00元 |
【产品简介】
本制品是适用于染料法进行RNA定量实验的专用试剂,Real-Time PCR方法以其卓越的快速性及定量性被广泛应用于科研领域，使用本制品可以准确简便地进行RNA的定量或定性分析。本试剂盒采用高效的反应体系，利用一步法使RT和PCR在同一反应体系中进行，反应过程中不需要添加试剂，无需打开管盖，避免了污染，同时提高了检测的灵敏度，可检测低至0.01pg的总RNA。本试剂盒可直接的用于对RNA模板的绝对定量的分析实验。
【试剂盒组成】
试剂盒组成 | LK-0111A (20μl×50次) | LK-0111B (20μl×100次) |
One Step PCR Master Mix(2×) | 0.5ml×1支 | 1ml×1支 |
One Step PCR Enzyme Mix | 50μl×1支 | 100μl×1支 |
RNase Free ddH2O | 1ml×1支 | 1ml×1支 |
说明书 | 1份 | 1份 |
【适用荧光PCR仪器】
以下机型需要另购Rox Reference Dye(25mM)货号： LK-0114。
注意：ABI Prism7500，ABI Prism7500 Fast, MJ Research Chromo4，Corbett Rotor Gene 3000机型，添加ROX Reference Dyev 0.4µl/反应（0.1X）。
ABI Prism7000/7300/7700/7900 , Eppendorf , ABI Step One, ABI Step One Plus机型，添加ROX Reference DyeI 0.4µl/反应(1X)。
【试剂运输及储存条件】
试剂盒运输可在2-8℃环境下进行。储存时，须置-20℃避光保存。有效期为12个月，请在有效期内使用。
【操作步骤】
1. 完全融化模板，将特异性引物及试剂盒中的试剂离心后置于冰浴上。
2. PCR试剂准备：在冰浴条件下按下表配制反应液（举例）
一步法PCR反应：
反应成分 | 体积/反应 | 终浓度 |
One Step PCR Master Mix(2×) | 15ml | 1× |
One Step PCR Enzyme Mix | 1 ml | |
Forward Primer（20mM） | 0.15-0.3ml | 0.1-0.2mM |
Reverse Primer（20mM） | 0.15-0.3ml | 0.1-0.2mM |
RNA 模板 | 2-5ml | |
RNase Free ddH2O | 补水至30ml | |
总体系 | 30ml |
3. PCR扩增检测（在扩增检测区进行）
循环参数设定：（请参照各类仪器的操作软件进行设置）
步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 | |
1 | 反转录反应 | 42-50℃ | 15-30分钟 | 1 |
2 | 预变性 | 94℃ | 2分钟 | 1 |
3 | 变性 | 94℃ | 15秒 | 40 |
退火 | 55℃ | 30-60秒 | ||
延伸及检测荧光 | 72℃ | 30-90秒 | ||
步骤3中进行荧光检测 | ||||
结果检测：反应结束后取10ml反应产物，琼脂糖凝胶电泳检测。
【注意事项】
1.待检标本若不及时检测，应保存于-20℃。
2.实验相关耗材应用0.1％DEPC(焦碳酸二乙酯)水溶液在37℃处理12小时，并高压灭菌30分钟后使用。
3.试剂盒各组份使用前请充分融化并摇匀，离心管内的试剂需离心数秒后使用。
4.PCR操作各阶段应在不同实验区域进行，包括PCR扩增试剂准备区、标本处理区及PCR扩增检测区。
5.人的皮肤表面和唾液都有RNase，应穿工作服，戴一次性手套（经常替换手套），使用一次性用品。
6.PCR操作人员应具有经验和受过培训。
7.操作过程中用到的超净台、加样枪、离心机、扩增仪等仪器设备应经常用10%次氯酸或70%乙醇及紫外灯处理。
8.实验中废弃的吸嘴应弃于含10%次氯酸的废液缸中，以防止污染。
9.实验后，扩增管切勿打开，并且将其丢弃在实验区以外区域。
注：本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品等用途。
