细菌总RNA快速抽提试剂盒

     Bacteria Total RNA Extraction Kit

   细菌总RNA快速抽提试剂盒

【产品简介】

本试剂盒是一种细菌总RNA快速抽提试剂盒。由于细菌RNA半衰期很短，RNA很容易发生降解。针对这一难题，本试剂盒采用溶菌酶与裂解液共同作用，快速裂解样品，可获得浓度高、完整性好的RNA。适合于从各种来源的细菌（革兰氏阳性或阴性菌等）培养液中快速提取RNA。

【试剂盒组成】

注意：需要自备无水乙醇、溶菌酶、氯仿等。

【试剂运输及储存条件】

可常温条件下运输。储存时，裂解液LB 2-8℃保存，其余组分可保存在室温，一年有效。

【操作步骤】

1.       取1 ml对数生长期的细菌，8,000 rpm 4°C离心1 min，彻底弃掉培养基，加100 µl溶菌酶，振荡混匀。

注意：革兰氏阴性菌使用的溶菌酶浓度为400 µg/ml，室温酶解3~5分钟；革兰氏阳性菌使用的溶菌酶浓度为3 mg/ml，室温酶解5~10分钟。）收集菌体后可用500 µl 无核酸酶水漂洗一次，10,000 rpm离心1分钟，弃上清，进一步去除残留的培养基。

溶菌酶缓冲液配方：20 mM Tris, pH 8.0；2 mM Na2-EDTA；1.2% Triton；配制终浓度为20 mg/ml的溶菌酶(溶菌酶必须用溶菌酶干粉溶解在缓冲液中进行配制，否则会导致溶菌酶无活性)。

2.  加入裂解液LB 1ml 将裂解物于室温静置5min后，加入0.2ml三氯甲烷，小心盖上管盖，剧烈摇动15s。

注意：请不要漩涡震荡，避免引入DNA污染。

3.       将离心管再次置于室温2-3min，然后4℃，10,000 x g离心10min。

注意：离心会使溶液分为三相，含有RNA的水相上清液，包含蛋白和DNA的中层以及包含DNA的下层有机相。在 4℃离心对于溶液的分层是非常关键的。

4.       将上清水相转移至另一新的无RNA酶离心管中，并加入1.5倍体积的100%乙醇，漩涡振荡混匀5s。

5.       立即吸取700μl样品以及有可能形成的沉淀，加入带有2ml收集管的离心纯化柱。轻盖盖子，10,000 x g，室温离心15s，弃尽废液。

6.       将剩余的样品转移至离心柱，重复第6步。

7.       往离心柱中加入700μl漂洗液WB，轻盖盖子，10,000 x g，室温离心15s，弃尽废液。

注意：第一次使用前请确认是否已经按照标签提示漂洗液WB中加入适量无水乙醇。

8.       往离心柱中加入500μl漂洗液WB，轻盖盖子，10,000 x g，室温离心15s，弃尽废液，重复一次，之后10,000 x g离心空柱2min干燥硅胶膜。

注意：完全去除洗液对最后溶解是非常重要的，洗液的残留会影响最终的洗脱。

9.       将离心柱转移至一新的无RNA酶的1.5ml离心管中，往硅胶膜中央滴加50μl无核酸酶水，轻盖管盖，室温静置1-5min，10,000 x g 离心1min洗脱RNA。

注意：洗脱体积不宜小于50μl，否则会影响洗脱效果。

10.   把洗脱液滴加回硅胶膜重复第10步洗脱。

11.   如需后续操作，请始终将溶解的RNA至于冰上，保存请置于-80℃。

注：本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品等用途。