MicroRNA提取纯化试剂盒（离心柱）

MicroRNA Extraction and Purification Kit （Spin Column）

MicroRNA提取纯化试剂盒（离心柱）

【产品简介】

   本试剂盒的裂解抽提试剂采用独特的配方和添加剂，能高效的裂解细胞和组织，有效的去除大片段RNA，富集纯化200bp以下的小RNA。另外本试剂还可以有效地抑制各种外源性和内源性的核酸酶，同时结合特制的纯化柱，能最大限度的保持核酸的完整性、高得率以及纯度。

【试剂盒组成】

注意：第一次使用前，请按照标签提示向漂洗液WB1, WB2中加入适量无水乙醇。

【试剂运输及储存条件】

试剂运输可在常温环境下进行。储存时，可保存在室温。裂解液LB存放于4℃。本试剂盒有效期为12个月，请在有效期内使用。

【操作步骤】

1.       A: 从组织中提取纯化MicroRNA，在冷冻的研钵中切下一小块深层冷冻的组织样品，并用电子天平称量。然后立即将该组织转移至加有1ml裂解液LB的无RNA酶的离心管中，用电动匀浆机在冰浴中匀浆组织约15s直到看不见明显的组织块，之后操作见第2步。

注意：组织样品应储存于液氮或低温冰箱(-80℃)。该实验流程只适用于在小于30mg的组织样品中抽提MicroRNA，过多组织的用量可能会减少核酸得率。

B:从细胞样品中提取纯化MicroRNA，先把培养皿或培养瓶置于冰上，弃尽培液，用预冷的1XPBS洗涤细胞两次。然后加入1ml裂解液LB，用细胞刮刮下所有细胞，将裂解物转移至无RNA酶的1.5ml离心管中，充分振荡30s，之后操作见第2步。

注意： 1. 试剂盒中不提供 1xPBS。2. 重悬细胞还可以先将细胞2000xg，离心3min，用1xPBS洗涤后再加入1ml裂解液LB。3. 该实验流程只适用于从少于1x10⁶细胞中提取RNA，过多细胞用量可能会减少核酸得率（建议细胞标本在10⁵与 10⁶ 之间）。

C:从血清、血浆、细胞培养液及体液等样品中提取少量miRNA，1ml裂解液LB与200ul液体标本混合，之后操作见第2步。

2.       把裂解物于室温静置2min后，加入0.2ml三氯甲烷，小心盖上管盖，剧烈摇动15s。

注意：请不要漩涡震荡。

3.       将离心管再次置于室温2min，然后4℃，12,000 x g离心15min。

4.       将450μl上清水相转移至另一新的无RNA酶离心管中，并加入等体积的60%乙醇，漩涡振荡混匀5s。

注意：上清体积吸取450μl为宜，吸取过多上清会造成基因组污染。

5.       立即吸取500μl样品以及有可能形成的沉淀，加入带有2ml收集管的RNA分离柱。轻盖盖子，10,000 x g，室温离心15s，收集流穿液于另一干净的1.5ml离心管中。

6.       将剩余的样品转移至RNA分离柱，收集流穿液于另一干净的1.5ml离心管中，重复第6步。

7.       向收集的两管流穿液中分别加入1.5倍体积的无水乙醇，漩涡振荡混匀后立即吸取700μl样品以及有可能形成的沉淀，加入带有2ml收集管的miRNA离心纯化柱。轻盖盖子，10,000 x g，室温离心15s，弃尽废液。

8.       往miRNA离心纯化柱中加入700μl漂洗液WB1，轻盖盖子，10,000 x g，室温离心15s，弃尽废液。

注意：第一次使用前请确认是否已经往漂洗液WB1中加入44ml无水乙醇。

9.       往miRNA离心纯化柱中加入500μl漂洗液WB2，轻盖盖子，10,000 x g，室温离心15s，弃尽废液，重复一次，最后一次洗涤后，10,000 x g离心空柱2min干燥硅胶膜。

注意：第一次使用前请确认是否已经往漂洗液WB2加入96ml无水乙醇。完全去除洗液对最后溶解是非常重要的，洗液的残留会影响最终的洗脱。

10.   将miRNA离心纯化柱转移至一新的无RNA酶的1.5ml离心管中，往硅胶膜中央滴加50μl洗脱液EB，轻盖管盖，室温静置2-5min，10,000 x g 离心1min洗脱RNA。

注意：洗脱体积不宜小于30μl，否则会影响洗脱效果。

11.   把洗脱液滴加回硅胶膜重复第10步洗脱。

12.   如需后续操作，请始终将溶解的RNA至于冰上，保存请置于-80℃。

注：本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品等用途。