石蜡包埋样品小RNA 抽提试剂盒
产品分类： RNA及MicroRNA提取
主要产品有：福尔马林固定，石蜡包被（FFPE）组织样品是人们诊断和预测疾病的主要组织来源，也同时用作分子及遗传研究。但是和新鲜组织样品不同，石蜡包埋样品中大多数DNA和 RNA分子在固定时以及长期储存的过程中，降解为小片段，更进一步的是福尔马林诱导的核酸和蛋白交联限制了DNA或者RNA从被固定的细胞中释放，然而随着技术的发展，现在已经能够从石蜡包埋样品中提取到高质量的DNA和RNA。
石蜡包埋样品总RNA抽提试剂采用独特的配方，能高效的进行石蜡样品脱蜡前处理，裂解组织及其细胞，甚至是用于富含脂肪的组织，另外本试剂还可以有效地抑制各种外源性和内源性的RNA酶，同时结合特制的纯化柱，并采用独特的配方和添加剂，能高效的裂解细胞和组织，有效地去除大片段RNA，富集纯化200bp以下的小RNA。另外本试剂还可以有效地抑制各种外源性和内源性的核酸酶，同时结合特制的纯化柱，能最大限度的保持核酸的完整性、高得率以及纯度。
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石蜡包埋样品小RNA抽提试剂盒
产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品价格 |
LN-0114A | 石蜡包埋样品小RNA抽提试剂盒 | 50次 | 750.00元 |
LN-0114B | 100次 | 1350.00元 |
【产品简介】
福尔马林固定，石蜡包被（FFPE）组织样品是人们诊断和预测疾病的主要组织来源，也同时用作分子及遗传研究。但是和新鲜组织样品不同，石蜡包埋样品中大多数DNA和 RNA分子在固定时以及长期储存的过程中，降解为小片段，更进一步的是福尔马林诱导的核酸和蛋白交联限制了DNA或者RNA从被固定的细胞中释放，然而随着技术的发展，现在已经能够从石蜡包埋样品中提取到高质量的DNA和RNA。
石蜡包埋样品总RNA抽提试剂采用独特的配方，能高效的进行石蜡样品脱蜡前处理，裂解组织及其细胞，甚至是用于富含脂肪的组织，另外本试剂还可以有效地抑制各种外源性和内源性的RNA酶，同时结合特制的纯化柱，并采用独特的配方和添加剂，能高效的裂解细胞和组织，有效地去除大片段RNA，富集纯化200bp以下的小RNA。另外本试剂还可以有效地抑制各种外源性和内源性的核酸酶，同时结合特制的纯化柱，能最大限度的保持核酸的完整性、高得率以及纯度。
【试剂盒组成】
试剂盒组成 | LN-0114A(50次) | LN-0114B (100次) |
裂解液LZ | 60ml | 120ml |
缓冲液PDB | 18ml | 36ml |
蛋白酶K | 900μl | 1.8ml |
漂洗液WB1 | 22ml | 44ml |
漂洗液WB2 | 18ml | 36ml |
洗脱液EB | 2×2ml | 4×2ml |
miRNA离心纯化柱 | 50个 | 100个 |
RNA分离柱 | 50个 | 100个 |
说明书 | 1份 | 1份 |
【运输及储存条件】
常温运输。裂解液LZ须置4℃保存，蛋白酶K须置-20℃保存，其余组分可室温保存。本试剂盒有效期为12个月，在有效期内使用。
【操作步骤】
1. 切下5片厚度约为10μm（重约10mg）的组织块，尽量切去石蜡部分，置于1.5ml的离心管中。
注意：该实验流程只适用于在10mg左右的组织样品中抽提总RNA，样品不宜过多，否则消化组织是非常困难的。
2. 加入1ml二甲苯，并振荡30s，然后室温放置5分钟。
3. 室温，14000 x g 离心3 min，用移液器移尽上清，并加入1ml 无水乙醇。
4. 振荡离心管20s，然后室温，14000 x g离心3 min。
5. 用移液器移去上清，室温干燥组织沉淀15min。
注意：任何残留的乙醇可能会影响蛋白酶K的消化以及减少核酸的得率。
6. 加入290μl的PDB缓冲液重悬沉淀，并加入10μl蛋白酶K（30mg/ml）溶液，振荡混匀。
7. 将离心管置于50℃温浴3 hours，然后置于70℃ 20min。
8. 往离心管中加入1 ml裂解液LZ，振荡混匀30s。
9. 将离心管置于室温5min后，加入0.2ml三氯甲烷，小心盖上盖子，剧烈摇动15s。
注意：不要振荡离心管，从而造成 DNA 对RNA 的污染。
10. 将离心管置于室温2-3min，4℃，12000 x g离心15min。
注意：离心会使溶液分为三相，含有 RNA的水相上清液，包含蛋白和 DNA 的中层以及包含 DNA 的下层有机相。 在 4℃离心对于溶液的分层是非常关键的。
11. 将450μl上清水相转移至另一新的无RNA酶离心管中，并加入等体积的60%无水乙醇，漩涡振荡混匀5s。注意：上清体积吸取450μl为宜，吸取过多上清会造成基因组污染。需要自行配置60%无水乙醇溶液。
12. 立即吸取500μl样品以及有可能形成的沉淀，加入带有2ml收集管的RNA分离柱。轻盖盖子，10,000 x g，室温离心15s，收集流穿液于另一干净的1.5ml离心管中。
13. 将剩余的样品转移至RNA分离柱，收集流穿液于另一干净的1.5ml离心管中，重复第12步。
14. 向收集的两管流穿液中分别加入1.5倍体积的无水乙醇，漩涡振荡混匀后立即吸取700μl样品以及有可能形成的沉淀，加入带有2ml收集管的miRNA离心纯化柱。轻盖盖子，10,000 x g，室温离心15s，弃尽废液。
15. 往miRNA离心纯化柱中加入700μl漂洗液WB1，轻盖盖子，10,000 x g，室温离心15s，弃尽废液。
注意：第一次使用前请确认是否已经往漂洗液WB1中加入适量 无水乙醇。
16. 往miRNA离心纯化柱中加入500μl漂洗液WB2，轻盖盖子，10,000 x g，室温离心15s，弃尽废液，重复一次，最后一次洗涤后，10,000 x g离心空柱2min干燥硅胶膜。
注意：第一次使用前请确认是否已经往漂洗液WB2加入适量无水乙醇。完全去除洗液对最后溶解是非常重要的，洗液的残留会影响最终的洗脱。
17. 将miRNA离心纯化柱转移至一新的无RNA酶的1.5ml离心管中，往硅胶膜中央滴加50μl洗脱液EB，轻盖管盖，室温静置2-5min，10,000 x g 离心1min洗脱RNA。
注意：洗脱体积不宜小于30μl，否则会影响洗脱效果。
18. 把洗脱液滴加回硅胶膜重复第17步洗脱。
19. 如需后续操作，请始终将溶解的RNA至于冰上，保存请置于-80℃。
