动物组织细胞DNA/RNA共提取试剂盒
产品分类： RNA及MicroRNA提取
主要产品有：本试剂盒的抽提试剂采用独特的配方和添加剂，能高效的裂解细胞和组织，在短时间内同时分别分离DNA和RNA，还可以有效地抑制各种外源性和内源性的核酸酶，同时结合特制的纯化柱，能最大限度的保持核酸的完整性、高得率以及纯度。
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动物组织细胞DNA/RNA共提取试剂盒
产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品价格 |
LN-0113A | 动物组织细胞DNA/RNA共提取试剂盒 | 50次 | 750.00元 |
LN-0113B | 100次 | 1350.00元 |
【产品简介】
本试剂盒的抽提试剂采用独特的配方和添加剂，能高效的裂解细胞和组织，在短时间内同时分别分离DNA和RNA，还可以有效地抑制各种外源性和内源性的核酸酶，同时结合特制的纯化柱，能最大限度的保持核酸的完整性、高得率以及纯度。
【试剂盒组成】
试剂盒组成 | LN-0113A (50次) | LN-0113B (100次) |
RNase A | 100μl | 200μl |
DNase Buffer | 100μl | 200μl |
DNase I | 50μl | 100μl |
裂解液LB | 40ml | 80ml |
吸附液BEH | 4ml | 8ml |
漂洗液WB1 | 40ml | 80ml |
漂洗液WB2 | 30ml | 2×30ml |
洗脱液EB | 3×2ml | 12ml |
DNA离心纯化柱 | 50个 | 100个 |
RNA离心纯化柱 | 50个 | 100个 |
说明书 | 1份 | 1份 |
注意：使用前请按照标签提示在漂洗液WB1中适量无水乙醇，漂洗液WB2中加入适量无水乙醇。储存时，DNase I和RNase A在-20℃保存。
【试剂运输及储存条件】
试剂运输可在常温环境下进行。储存时，室温保存。一年有效。
【操作步骤】
1. A:从组织中提取总DNA和RNA，在冷冻的研钵中切下约10mg深层冷冻的组织样品，并用电子天平称量。然后立即将该组织转移至加有700μl裂解液LB的无核酸酶的离心管中，用电动匀浆机在冰浴中匀浆组织约15s直到看不见明显的组织块，之后操作见第2步。
注意：组织样品应储存于液氮或低温冰箱(-80℃)。该实验流程只适用于在小于30mg的组织样品中抽提核酸。
B:从细胞样品中提取DNA和RNA，先把培养皿或培养瓶置于冰上，弃尽培液，用预冷的1XPBS洗涤细胞两次。然后加入700μl裂解液LB，用细胞刮刮下所有细胞，将裂解物转移至无核酸酶的1.5ml离心管中，充分振荡30s，之后操作见第3步。
注意：1. 试剂盒中不提供1XPBS，可另外配制。2. 重悬细胞还可以先将细胞2000xg，离心3min，用1XPBS洗涤后再加入500μl裂解液LB。3. 该实验流程只适用于从少于1 x 106细胞中提取核酸。
2. 往裂解物中加入50μl吸附液BEH（如加入0.1%的巯基乙醇效果更佳），振荡混匀5s。
3. 把裂解物于室温静置1min后，加入0.5ml三氯甲烷，小心盖上管盖，剧烈摇动15s。注意：请不要漩涡震荡。
4. 将离心管再次置于室温1min，4℃，12,000xg离心15min。将上清水相转移至另一新的无核酸酶离心管中，并加入等体积的10%异丙醇，用移液器轻柔吹打混匀。注意：10%异丙醇需自行按比例配制。
基因组DNA提取
5. 立即吸取700μl样品以及有可能形成的沉淀，加入带有2ml收集管的DNA离心纯化柱。轻盖盖子，11,000xg，室温离心1min，收集流穿液在另一新的1.5ml离心管中。
注意：完成穿流液收集后，立即将穿流液置于冰浴，待后续RNA提取中使用。
6. 将剩余的样品转移至离心柱，重复第6步。
7. 向每份样品的膜中央滴加20μl RNase A消化液，室温静置20min。每份样品所需RNase A消化液量的配制如下。
组份 | 用量/样品 |
RNase A | 2μl |
DEPC ddH2O | 18μl |
总体积 | 20μl |
8. 往离心柱中加入700μl漂洗液WB1，轻盖盖子，室温放置2min，11,000xg，室温离心15s，弃尽废液。
注意：第一次使用前请确认是否已经往漂洗液WB1中加入适量无水乙醇。
9. 往离心柱中加入500μl漂洗液WB2，11,000xg , 室温离心15s，弃尽废液。重复步骤洗涤一次。
注意：第一次使用前请确认是否已经往漂洗液WB2中加入适量无水乙醇。完全去除洗液对最后溶解是非常重要的，洗液的残留会影响最终的洗脱。
10. 11,000 x g离心空柱1min干燥硅胶膜。
11. 将离心柱转移至新的无核酸酶的1.5ml离心管中，往硅胶膜中央滴加60μl洗脱液EB，轻盖管盖，室温静置1min，11,000xg离心1min洗脱DNA。
12. 把洗脱液滴加回硅胶膜重复第14步洗脱。
13. 如需后续操作，请始终将溶解的DNA至于冰上，保存请置于-80℃。
总RNA提取
6. 如需抽提总RNA，则在上述第5步收集的流穿液中加入等体积的无水乙醇，漩涡震荡3s后立即吸取700μl样品以及有可能形成的沉淀，加入带有2ml收集管的RNA离心纯化柱。轻盖盖子，11,000xg，室温离心1min，弃尽废液。注意：流穿液可能较多，需分管操作。
7. 将剩余的样品转移至离心柱，重复第7步。
8. 向每份样品的膜中央滴加20μl DNase消化液，室温静置20min。DNase消化液配制见下表。
组份 | 用量/样品 |
DNase Buffer | 2μl |
DNase I | 1μl |
DEPC ddH2O | 17μl |
总体积 | 20μl |
9. 往离心柱中加入700μl漂洗液WB1，轻盖盖子，室温放置2min，11,000xg，室温离心15s，弃尽废液。
10. 往离心柱中加入500μl漂洗液WB2，11,000xg , 室温离心15s，弃尽废液。重复步骤洗涤一次。
11. 11,000xg离心空柱2min干燥硅胶膜。
12. 将离心柱转移至新的无核酸酶的1.5ml离心管中，往硅胶膜中央滴加50μl洗脱液EB，轻盖管盖，室温静置1min，11,000xg离心1min洗脱RNA。注意：洗脱体积不宜小于50μl，否则会影响洗脱效果。
13. 把洗脱液滴加回硅胶膜重复第15步洗脱。
14. 如需后续操作，请始终将溶解的RNA至于冰上，保存请置于-80℃。
